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JMT日本医疗——京都大学开发利用iPS细胞来源肌腱细胞再生断裂肌腱的移植手术②
作者:JMT日本医疗 时间:2022-03-18 10:47:32

尽管细胞移植疗法具有潜力,但仍有问题需要解决,期待有新的方法来克服这些问题。


在此背景下,研究小组正在研究一种使用人类iPS细胞产生的肌腱细胞的治疗方法。迄今为止,虽然由iPS细胞和间充质干细胞制造了肌腱细胞,但从人类iPS细胞中诱导肌腱细胞并进行细胞移植治疗的研究,据说还是第一次。


人体肌腱细胞发育时从“中胚层”开始。2018年8月,研究小组报道,在体外从人iPS细胞中诱导出“眼前节中胚层细胞”和“体节细胞”,进而诱导“硬结细胞”和肌腱/韧带细胞分化,成功开发了模型。


然而,在2018年宣布的分化诱导方法中,在培养细胞的过程中使用了动物来源的成分。但是,在本研究中,为了今后应用于人体细胞移植治疗,据说对不使用任何动物来源成分的“Xeno-Free条件”下的分化诱导方法进行了改进。


根据改良型分化诱导法,用19天时间从人IPS细胞制作腱细胞,实施免疫染色后,确认了腱细胞特有的转录因子(SCX、MKX、COL1、COL1A2)出现。


iPS细胞首先在19天内被诱导分化为“未分段的体节”,然后经过“体节”和“骨节”,最后成为肌腱细胞(来源:京大PDF)


人iPS来源的肌腱细胞。比例尺表示50μm。(左)肌腱细胞的显微图像。(右)肌腱细胞特有的转录因子的免疫染色图像(来源:京都大学新闻发布PDF)


再者,用单细胞RNA测序法比较iPS肌腱细胞和原代肌腱细胞(肌腱细胞原代培养的肌腱细胞)的基因表达时,虽然更接近原代肌腱细胞,但距离100 %一致还很远,并证实分化诱导技术的进一步改进是必要的。


通过单细胞RNA测序比较iPS来源的肌腱细胞和原代肌腱细胞(从实际肌腱细胞培养的细胞)之间的基因表达。(左)硬节和被诱导分化成肌腱细胞的第2、4、6、8天(从iPS细胞诱导分化总共是第19天),以及初级肌腱细胞的比较。第8天目录更接近初级肌腱细胞,但仍有很大不同。(右)左侧基因表达比较图的更易于理解的总结。通过关注关键基因来评估表达程度,可以看出iPS来源的肌腱细胞比硬结更接近原代肌腱细胞,但仍远未完全一致。似乎有必要进一步开发差异化感应技术(来源:京大会见资料PDF)


尽管仍有一些需要改进的地方,但使用iPS细胞可以解决确保移植所需的大量肌腱细胞的问题,因此创建了iPS来源肌腱来研究细胞移植作为治疗是否有效采用跟腱断裂模型大鼠进行动物实验。在模型大鼠中,左后腿跟腱在跟骨关节上方约5毫米处被截断(部分肌腱未切除),用注射器将300万个肌腱细胞移植到这里,进行4周的随访。


在这次的实验中,直接使用了人类iPS细胞在Xeno-Free条件下制作的肌腱细胞。也就是说,严格来说这对老鼠的身体来说是有问题的,但是研究团队在理解了这一点的基础上,直接对模型老鼠使用了人类iPS肌腱细胞进行了实验。


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