另外,为了比较再生后的腱的物性,制作了负重位移曲线,结果证实,未治疗的跟腱呈现出平缓的曲线,而再生跟腱的行为与健康跟腱相似。然而,虽然相似,但发现再生的跟腱不如健康的跟腱。
跟腱的显微镜比较。可见,目前的细胞移植还是不如健康的跟腱。(左)移植组(细胞移植大鼠)的跟腱。远离健康的跟腱,可以看到接近未治疗(非移植组)的斑驳外观。(中心)来自非移植组(未处理的大鼠)。感觉比移植组还要斑驳。(右)未破裂组(健康大鼠)。你可以看到它是平滑的(来源:京大会见资料PDF)
这样就证实了再生跟腱的最大负荷较高,负荷位移曲线接近于健康跟腱,虽然不如健康跟腱,但其耐久性和与未经处理的跟腱相比,物理性能得到恢复。这一次,实验持续了长达4周,所以如果花更多的时间,它可能会恢复到更健康的跟腱。
此外,作为用于研究移植的肌腱细胞的植入和组织状况的组织学评价,移植后24小时、2周和4周研究了移植的人类iPS来源肌腱细胞的荧光分布。结果发现,移植的肌腱细胞并没有散布在血液中的全身各处,而是停留在移植部位的左后腿跟腱附近。
移植的iPS来源肌腱细胞的分布。在iPS来源的肌腱细胞中加入荧光染料,比较移植后24小时、2周、4周(最左边为移植前)的荧光分布。可以看出移植的肌腱细胞停留在移植部位并进行移植(来源:京都大学新闻发布PDF)。
此外,在移植后2周对再生的跟腱应用I型胶原蛋白、III型胶原蛋白和人类特异性“波形蛋白”三种蛋白质进行免疫染色时,已确认波形蛋白阳性移植细胞表达了胶原蛋白。这表明,移植的肌腱细胞能够存活,并作为小白鼠跟腱的一部分发挥一定程度的功能。另一方面,在未治疗的跟腱中,确认了很多未再生部分没有胶原蛋白生成。
细胞移植跟腱的组织学评估(截肢后2周)。人类特异性波形蛋白免疫染色为红色,I型胶原蛋白和III型胶原蛋白免疫染色为绿色。(左)未经治疗的大鼠。虚线内的部分是胶原蛋白未再生部分。(中/右)细胞移植大鼠。可以确认维生素(来源:京都大学新闻发布PDF)
这些结果表明,外部生成的人类iPS来源的肌腱细胞即使在移植后仍然发挥必要的功能,并且与未经治疗的相比,它们具有明显的治疗效果。
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